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OCTN1CRISPR激活质粒(h) | sc-403258-ACT | 20 µg | $397.00 |
SLC22A4 编码人类有机阳离子/肉碱转运体 OCTN1。OCTN1 是一种多特异性溶质载体,可在质膜两侧调控小分子阳离子代谢物的细胞摄取与外排。OCTN1 通过转运麦角硫因(ergothioneine)及相关有机阳离子等底物,参与营养物质处理与氧化还原稳态维持,进而影响细胞内抗氧化能力与代谢适应。借助这些转运活动,SLC22A4 与塑造上皮屏障功能、免疫细胞生理以及外源化合物处置的膜转运网络相互交织。文献报道,SLC22A4 的遗传变异与表达异常与炎症和自身免疫表型以及细胞应激反应的改变相关,提示其在免疫代谢与上皮生物学机制研究中具有重要意义。
OCTN1 CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性SLC22A4的表达。
OCTN1 CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的SLC22A4基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于SLC22A4转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性OCTN1表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的SLC22A4位点,并能够研究内源性位点上依赖于OCTN1的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在SLC22A4表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟OCTN1通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。