OCT2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-422991-ACT

Slc22a2 codifica o transportador de cátions orgânicos 2 (OCT2), um transportador de solutos poliespecífico expresso predominantemente no epitélio do túbulo proximal renal, onde medeia a captação basolateral, a partir da circulação, de aminas endógenas e de diversos xenobióticos. O OCT2 molda a secreção renal ao atuar em conjunto com transportadores de efluxo apicais e influencia o processamento celular de metabólitos catiônicos, afetando assim a exposição intracelular e as respostas ao estresse no tecido renal. Devido ao seu papel central em redes de transportadores que controlam a farmacocinética e a depuração metabólica, alterações na atividade de Slc22a2 são relevantes para estudos de nefrotoxicidade, interações fármaco–fármaco e variabilidade interindividual no destino de compostos no organismo. Em modelos murinos, o OCT2 é frequentemente investigado para relacionar a função do transportador com a fisiologia renal, a sensibilidade a tóxicos e a homeostase sistêmica de metabólitos.

OCT2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Slc22a2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

OCT2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Slc22a2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Slc22a2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de OCT2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Slc22a2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de OCT2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via OCT2 em células tumorais com expressão de Slc22a2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.