OATP-C CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402898-ACT

SLCO1B1は、ヒト有機アニオン輸送ポリペプチドOATP-C（OATP1B1）をコードしており、肝細胞に豊富に発現する多基質性の取り込みトランスポーターです。OATP-Cは、胆汁酸、ビリルビン抱合体、ステロイドホルモン代謝物、甲状腺ホルモン、および多様な外因性化合物（キセノバイオティクス）などを、ナトリウム非依存的に細胞内へ取り込ませます。肝細胞への類洞側からの取り込みを制御することで、OATP-Cは肝クリアランス、腸肝循環、および内因性代謝物や低分子基質の全身曝露量に影響を与えます。SLCO1B1の機能は、フェーズI/II酵素やABC排出トランスポーターと協調して働く解毒・代謝経路とも交差し、薬物動態ネットワークにおけるトランスポーター—酵素間の相互作用を形成します。遺伝的多型や発現調節の破綻は、薬物動態の変化やトランスポーター介在性副作用への感受性の違いと関連しており、肝機能、高ビリルビン血症、薬物—薬物相互作用の機序といった観点から研究されています。

OATP-C CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SLCO1B1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

OATP-C CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SLCO1B1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSLCO1B1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性OATP-Cの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSLCO1B1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるOATP-C依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSLCO1B1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるOATP-C経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。