Plásmido CRISPR de Activación (m) NUMB: sc-421991-ACT
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmdo de Activación CRISPR (m) NUMB es un sistema de activación de la trascripción mediante una activación sinérgica (SAM), diseñado para incrementar la expresión de un gen concreto
- Los Plásmdo de Activación CRISPR (m) NUMB incluyen los siguientes tres plásmidos, con un radio 1:1:1 : plásmido codificador de la nucleasa Cas 9 desactivada (dCas9), (D10A y N863A) fusionadas al dominio de transactivación VP64 y el gen de resistencia a blasticidina; plásmido codificador de la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 y el gen de resistencia a Higromicina; plásmido codificador de la secuencia diana específica de 20 nt de ARN y el gen de resistencia a puromicina.
- El complejo SAM resultante se une en un punto específico a unos 200 -250 nt aguas arriba del inicio de la transcripción del gen diana y ofrece un potente punto de reclutamiento de factores de transcripción para un eficiente incremento de la activación genica.
- Los gRNA codificados por el plásmido de activación CRISPR NUMB (m) y el plásmido de activación CRISPR NUMB (m2) se dirigen a regiones reguladoras distintas situadas aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción de Numb. Puede que haya uno o ambos diseños disponibles
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: NUMB Anticuerpo (48): sc-136554
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido CRISPR de Activación (m) NUMB | sc-421991-ACT | 20 µg | $397.00 |
NUMB de ratón es una proteína adaptadora de la endocitosis que actúa como determinante del destino celular al regular la división celular asimétrica y el tráfico de receptores. Antagoniza la señalización de Notch y modula vías vinculadas a la ubiquitinación y la endocitosis, influyendo así en la proliferación, la diferenciación y el mantenimiento de células madre/progenitoras en múltiples tejidos. NUMB también se integra con programas de polaridad y adhesión mediante interacciones con la maquinaria endocítica y complejos de señalización, moldeando los patrones del desarrollo y las decisiones de linaje neuronal. La expresión o actividad desregulada de NUMB se ha asociado con estados de diferenciación alterados y redes de señalización relacionadas con tumores, lo que la convierte en un nodo útil para estudios mecanísticos de vías relevantes para el desarrollo y la enfermedad.
NUMB El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Numb sin alterar la secuencia de ADN subyacente.
NUMB El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Numb en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.
Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Numb, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de NUMB. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Numb y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de NUMB en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía NUMB en células tumorales con expresión de Numb silenciada o reducida.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.