NUDT8 Double Nickaseプラスミド (m): sc-425987-NIC
- 対象生物種: mouse
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- NUDT8 Double Nickaseプラスミド (m)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- NUDT8ダブルニカースプラスミド（m）およびNUDT8ダブルニカースプラスミド（m2）は、Nudt8を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
NUDT8 Double Nickaseプラスミド (m) | sc-425987-NIC | 20 µg | $410.00 |
Nudt8はNUDT8をコードしており、NUDT8はNudix加水分解酵素ファミリーの一員で、変異原性を持ち得る、またはシグナル伝達活性を有する可能性のあるヌクレオチド二リン酸誘導体を加水分解することで、細胞内ヌクレオチドプールを“サニタイズ（浄化）”する機能に関与すると考えられています。酸化された、あるいは非標準的（ノンカノニカル）なヌクレオチドの量を調節することにより、NUDT8はDNA複製の忠実度、酸化還元（レドックス）に関連したストレス応答、そしてミトコンドリアやペルオキシソームの恒常性と交差するヌクレオチド代謝経路に影響を及ぼし得ます。ヌクレオチドのサニタイズ機構の破綻は、ゲノム不安定性や炎症性ストレス表現型と広く関係するため、Nudt8は代謝状態とDNA損傷感受性を結び付けるメカニズムを検証するうえで有用な標的となります。マウスNudt8の研究は、酸化ストレスへの対処や核酸の品質管理におけるNudix酵素の組織特異的役割の解明に役立ちます。
NUDT8 ダブルニカースプラスミド（m）は、mouse 細胞株における Nudt8 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、Nudt8内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、Nudt8の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、Nudt8が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。