NUB1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-424677

概要

Nub1（NEDD8 ultimate buster 1）は、ユビキチン様修飾因子NEDD8に結合し、NEDD8が結合した基質のプロテアソーム依存的な除去を促進する、インターフェロン誘導性タンパク質NUB1をコードします。ネディレーション（neddylation）の動態や、カリュリン‐RING型E3リガーゼに関連するタンパク質のターンオーバーを制御することで、NUB1はユビキチン‐プロテアソーム系の恒常性、細胞周期の進行、ならびに細胞ストレス応答に影響を与えます。さらにNUB1はFAT10などのユビキチン様タンパク質とも相互作用し、自然免疫シグナル伝達と制御されたタンパク質分解を結び付けます。これらの経路の破綻は、プロテオスタシスの不均衡や炎症性シグナルの表現型にしばしば関与するため、Nub1はマウスモデルを用いた機序解析に有用な結節点（ノード）となります。

NUB1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるNub1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Nub1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Nub1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、NUB1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、NUB1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Nub1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• NUB1の機能に不可欠なNub1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Nub1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• NUB1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびNUB1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Nub1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  NUB1 HDRプラスミド（m）および NUB1 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはNub1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のNub1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。