NUAK1/ARK5 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-429607

概要

Nuak1は、AMPK関連キナーゼファミリーに属するセリン／スレオニンキナーゼであるNUAK1/ARK5をコードしており、細胞のエネルギー状態を、生存・極性・接着・細胞骨格リモデリングを制御する適応プログラムへと結び付ける役割を担います。NUAK1シグナルは、ミオシンホスファターゼ活性の調節、ストレス応答性キナーゼカスケード、ならびに栄養制限下における代謝応答の協調に関与することが示されています。マウス系では、エネルギー感知経路が細胞移動や侵襲様行動、ストレス誘導性アポトーシスへの抵抗性とどのように連動するかを解析するために、NUAK1/ARK5活性が利用されています。NUAK1/ARK5機能の破綻は腫瘍性および代謝性の表現型に関与するとされ、腫瘍生物学や細胞ストレスのモデルにおける機構的ハブとしての有用性を裏付けています。

NUAK1/ARK5 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるNuak1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Nuak1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Nuak1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、NUAK1/ARK5タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、NUAK1/ARK5シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Nuak1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• NUAK1/ARK5の機能に不可欠なNuak1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Nuak1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• NUAK1/ARK5 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびNUAK1/ARK5 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Nuak1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  NUAK1/ARK5 HDRプラスミド（m）および NUAK1/ARK5 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはNuak1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のNuak1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。