Plásmido CRISPR de Activación (h) NUAK1/ARK5: sc-403053-ACT

NUAK1 (también conocido como ARK5) codifica una quinasa de serina/treonina de la familia de quinasas relacionadas con AMPK, que acopla señales de energía y de estrés a programas celulares de supervivencia. NUAK1/ARK5 participa en redes de señalización aguas abajo de LKB1 e interseca con vías que controlan el metabolismo, la dinámica del citoesqueleto, la adhesión y la progresión del ciclo celular, incluida la modulación de la señalización MYPT1/PP1 y la contractilidad actomiosina. A través de estas funciones, NUAK1 se ha implicado en la regulación de la proliferación, la migración y la tolerancia al estrés en múltiples tipos celulares. La actividad y la expresión desreguladas de NUAK1 se han asociado con la biología tumoral y con otros contextos en los que se investigan la adaptación metabólica y el comportamiento invasivo.

NUAK1/ARK5 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de NUAK1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

NUAK1/ARK5 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus NUAK1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional NUAK1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de NUAK1/ARK5. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo NUAK1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de NUAK1/ARK5 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía NUAK1/ARK5 en células tumorales con expresión de NUAK1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.