NTR1 Double Nickaseプラスミド (h): sc-402552-NIC

NTSR1 はニューロテンシン受容体1（NTR1）をコードしており、NTR1 はニューロペプチドであるニューロテンシンに結合するクラスAの GPCR です。Gαq/PLCβ による Ca²⁺動員と PKC 活性化を介して細胞内シグナル伝達を制御し、さらに MAPK/ERK 経路や β-アレスチン介在性のトラフィッキングにも結合します。NTR1 は、受容体の脱感作、内在化、ならびに他の GPCR 経路とのクロストークを通じて、神経伝達、平滑筋収縮、分泌過程に影響を与えます。NTSR1 の発現やシグナル伝達の変化は、複数の疾患関連状況における増殖・炎症プログラムの破綻と関連づけられており、GPCR シグナル伝達ダイナミクスの機序研究に有用なノードとなります。さらに、リガンド刺激により迅速にエンドサイトーシスを起こす膜受容体として、NTR1 は受容体薬理学、区画化シグナル伝達、下流の転写応答を解析するためにも広く用いられています。

NTR1 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における NTSR1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、NTSR1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、NTSR1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、NTSR1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。