NRAMP 1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-402423

Visão geral

SLC11A1 codifica a NRAMP1, um transportador de metais divalentes acoplado a prótons, associado principalmente às membranas endossomais e fagossomais em células mieloides, onde regula o fluxo de Fe²⁺ e Mn²⁺ e molda a disponibilidade de metais dentro de compartimentos que contêm patógenos. Ao controlar a composição intravesicular de metais, a NRAMP1 influencia programas efetores antimicrobianos, o equilíbrio redox e a sinalização imune inata, que se cruzam com vias inflamatórias e com o processamento de antígenos. Variações genéticas ou expressão alterada de SLC11A1 têm sido associadas a diferenças na suscetibilidade a infecções intracelulares e à modulação de fenótipos inflamatórios, tornando esse locus útil para estudos de interação hospedeiro–patógeno e de regulação imune. Em modelos celulares humanos, a função da NRAMP1 é frequentemente investigada no contexto da ativação de macrófagos, da maturação do fagossomo e de mecanismos de limitação de nutrientes que afetam a persistência microbiana.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO NRAMP 1 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene SLC11A1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do SLC11A1, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do SLC11A1 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína NRAMP 1.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de SLC11A1 para a investigação da sinalização de NRAMP 1, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) SLC11A1 críticos para a função NRAMP 1
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos SLC11A1 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo NRAMP 1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo NRAMP 1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus SLC11A1. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo NRAMP 1 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR NRAMP 1 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia SLC11A1 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo SLC11A1 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.