NPT2b CRISPR Activationプラスミド (m2): sc-423004-ACT-2

マウスSlc34a2はナトリウム依存性リン酸輸送体タンパク質NPT2b（SLC34A2）をコードしており、これは上皮表面を介したNa⁺共役の無機リン酸取り込みを担う膜コトランスポーターとして機能し、全身のリン酸恒常性の維持に寄与する。NPT2bの活性は、細胞外のリン酸利用可能性を、リン酸フラックスに依存する細胞内のリン代謝やシグナル伝達プログラム（上皮輸送過程や石灰化関連経路など）へと結び付ける。SLC34A2機能の変化はリン酸の取り扱い異常と関連し、とりわけ肺におけるリン酸クリアランス低下に起因する肺胞微小結石症などの上皮性病態への関与が示唆されている。マウスモデルにおけるSlc34a2の遺伝学的改変は、上皮イオン輸送の機序、リン酸調節性遺伝子ネットワーク、ならびに呼吸器上皮を含む各組織上皮におけるリン酸調節破綻の組織特異的帰結を検討するための機構的研究を支持する。

NPT2b CRISPR活性化プラスミド（m2）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Slc34a2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

NPT2b CRISPR 活性化プラスミド (m2) は、ヒト細胞株における Slc34a2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSlc34a2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性NPT2bの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSlc34a2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるNPT2b依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSlc34a2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるNPT2b経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。