NPT2b CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403580-ACT

SLC34A2は、ナトリウム依存性リン酸トランスポーターNPT2b（NaPi-IIb）をコードしており、上皮表面を介した無機リン酸の取り込みを担う多回膜貫通型膜タンパク質である。NPT2bは、ヌクレオチド合成、リン脂質代謝、エネルギー依存性シグナル伝達に必要なリン酸恒常性を支え、トランスポーター活性を、より広範な代謝および分化プログラムと結び付けている。ヒト組織では、SLC34A2の発現は肺をはじめとする各種上皮で顕著であり、制御されたリン酸ハンドリングが肺胞および粘膜の生理に影響を及ぼす。SLC34A2の機能や発現の変化は、上皮機能障害やリン酸関連の病態生理と関連付けられており、膜輸送、栄養センシング、上皮リモデリングを研究するうえで有用な標的となる。

NPT2b CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SLC34A2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

NPT2b CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SLC34A2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSLC34A2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性NPT2bの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSLC34A2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるNPT2b依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSLC34A2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるNPT2b経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。