NPT2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-402216

Visão geral

SLC34A1 codifica a proteína humana de transporte de fosfato dependente de sódio 2A (NPT2), um cotransportador da membrana apical que medeia a captação eletrogênica de fosfato inorgânico acoplada aos gradientes de Na+ em células epiteliais. A NPT2 é um determinante fundamental da homeostase do fosfato e participa de vias de reabsorção no túbulo proximal renal que se interconectam com o metabolismo da vitamina D, a sinalização do hormônio da paratireoide e o manejo do fosfato regulado por FGF23. Alterações na função de SLC34A1 têm sido associadas a distúrbios do equilíbrio do fosfato, incluindo fenótipos ligados à nefrolitíase, hipofosfatemia e defeitos de mineralização, o que a torna relevante para o estudo da regulação do transporte epitelial e da sinalização metabólica. Em nível celular, a perturbação de SLC34A1 pode ser usada para investigar o tráfego de membrana, a cinética do transportador e o controle dependente de fosfato da bioenergética e do metabolismo de biominerais.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO NPT2 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene SLC34A1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do SLC34A1, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do SLC34A1 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína NPT2.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de SLC34A1 para a investigação da sinalização de NPT2, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) SLC34A1 críticos para a função NPT2
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos SLC34A1 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo NPT2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo NPT2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus SLC34A1. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo NPT2 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR NPT2 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia SLC34A1 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo SLC34A1 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.