NP2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403815-ACT

NPTX2 codifica la pentraxina neuronale-2 (NP2), una proteina sinaptica secreta implicata nel rimodellamento delle sinapsi dipendente dall’attività e nella maturazione dei circuiti eccitatori. NP2 partecipa a vie regolate dall’attività neuronale che influenzano l’aggregazione dei recettori sinaptici e le interazioni con la matrice extracellulare, sostenendo processi quali sinaptogenesi, plasticità e stabilità della rete. Alterazioni dell’espressione di NPTX2 sono state associate alla biologia di malattie neurodegenerative e neuropsichiatriche, in cui la disfunzione sinaptica e lo squilibrio tra eccitazione e inibizione sono caratteristiche comuni. Come indicatore molecolare dell’attività neuronale e dell’integrità sinaptica, NP2 è ampiamente studiata in modelli di rimodellamento dei circuiti, risposte allo stress e cambiamenti sinaptici associati all’infiammazione.

NP2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di NPTX2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

NP2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus NPTX2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione NPTX2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di NP2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus NPTX2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da NP2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via NP2 nelle cellule tumorali con espressione di NPTX2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.