Notch 3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-421933-ACT

O gene Notch3 de camundongo codifica o receptor Notch 3, um regulador transcricional transmembrana de passagem única, ativado por clivagem proteolítica dependente de ligante e pela translocação nuclear do domínio intracelular de Notch. Em células musculares lisas vasculares e pericitos, a sinalização de NOTCH3 ajuda a controlar decisões de destino celular, maturação e estabilidade dos vasos por meio da transcrição canônica mediada por RBPJ e do crosstalk com vias como TGF-β, PDGFR e MAPK. A atividade alterada de Notch3 está associada a programas de diferenciação desregulados e a respostas de remodelamento na biologia cardiovascular e neurovascular, sendo também frequentemente estudada em contextos de plasticidade de linhagem e redes de sinalização de células tumorais. Como resultado, Notch3 é um alvo comum para investigar sinalização do desenvolvimento, comunicação célula–célula e transições de estado transcricional em sistemas de modelos murinos.

Notch 3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Notch3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Notch 3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Notch3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Notch3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Notch 3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Notch3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Notch 3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Notch 3 em células tumorais com expressão de Notch3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.