NOS2/iNOS Plasmide Double Nickase (m): sc-421928-NIC

Nel topo, Nos2 codifica la nitric oxide synthase inducibile (NOS2/iNOS), un enzima che produce ossido nitrico a partire da L-arginina durante le risposte infiammatorie e dell’immunità innata. L’espressione di NOS2 è indotta a livello trascrizionale a valle di vie di segnalazione quali NF-κB, JAK/STAT e interferoni, contribuendo all’attivazione dei macrofagi, alla difesa antimicrobica e alla modulazione redox-dipendente della segnalazione cellulare. Un’attività prolungata di iNOS può provocare stress nitrosativo e S-nitrosilazione delle proteine, influenzando la funzione mitocondriale, le risposte al danno del DNA e l’apoptosi. Un’alterata regolazione di Nos2 è stata implicata in modelli di infezione, autoimmunità, neuroinfiammazione, disfunzione cardiovascolare e infiammazione associata ai tumori, rendendolo un nodo chiave per studi meccanicistici sul danno tissutale mediato dal sistema immunitario.

NOS2/iNOS Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Nos2 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Nos2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Nos2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Nos2 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.