Nopp140 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-402907-NIC

NOLC1 codifica a fosfoproteína nucleolar e dos corpos enrolados 1 (Nopp140), uma proteína nucleolar altamente fosforilada que transita entre o nucléolo e os corpos de Cajal para apoiar a biogênese de ribossomos e a dinâmica de RNPs nucleolares pequenas/RNPs específicas dos corpos de Cajal. A Nopp140 interage com componentes centrais da maquinaria de transcrição e processamento de rRNA e ajuda a organizar a arquitetura nucleolar, vinculando sua função à atividade da RNA polimerase I, à maturação do pré-rRNA e às respostas ao estresse nucleolar. A perturbação de NOLC1 pode alterar o processamento de rRNA, a integridade do nucléolo e a progressão do ciclo celular, tornando-o relevante para estudos mecanísticos de controle de crescimento e sinalização de estresse. Como a disfunção nucleolar é uma característica comum de diversos estados fisiopatológicos, NOLC1 é frequentemente investigado como marcador e regulador da homeostase nucleolar em modelos celulares relevantes para doenças.

Nopp140 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus NOLC1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de NOLC1. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função NOLC1. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com NOLC1 interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.