Plásmido CRISPR de Activación (h) Nopp140: sc-402907-ACT

NOLC1 codifica Nopp140, una fosfoproteína nucleolar y de los cuerpos de Cajal que actúa como andamiaje para el ensamblaje de ribonucleoproteínas y el transporte intranuclear. Nopp140 participa en la biogénesis de ribosomas al coordinar la dinámica de los snoRNP, el procesamiento del pre-ARNr y la organización nucleolar, y favorece la maduración de los snRNP del espliceosoma mediante interacciones con los cuerpos de Cajal. Su actividad está regulada por una fosforilación extensa y se vincula a programas transcripcionales dependientes de la ARN polimerasa I, a respuestas al estrés nucleolar y al control del crecimiento acoplado al ciclo celular. La desregulación de la homeostasis nucleolar y de las vías de procesamiento de ARN en las que participa NOLC1/Nopp140 es relevante para estudios sobre señalización proliferativa, estabilidad del genoma y remodelación de la expresión génica adaptativa al estrés en células humanas.

Nopp140 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de NOLC1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Nopp140 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus NOLC1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional NOLC1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Nopp140. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo NOLC1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Nopp140 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Nopp140 en células tumorales con expresión de NOLC1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.