NNT CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402908-ACT

ヒトNNT（nicotinamide nucleotide transhydrogenase：ニコチンアミドヌクレオチド・トランスヒドロゲナーゼ）はミトコンドリア内膜に存在する酵素で、プロトン駆動力を利用してNAD(H)とNADP(H)間の還元当量の移動を共役させ、ミトコンドリア内のNADPHプールを維持します。グルタチオン依存性およびチオレドキシン依存性の抗酸化システムを支えることで、NNTは活性酸素種（ROS）の制御に寄与し、酸化的リン酸化や代謝ストレス下でのレドックス恒常性を保ちます。NNT活性は、NADPH依存的な生合成・解毒経路への影響を通じて、ミトコンドリア呼吸、ステロイド生成、ならびにより広範な代謝シグナル伝達にも影響を与えます。NNT機能の撹乱はミトコンドリアのレドックス不均衡と関連するとされ、代謝機能障害や酸化ストレス緩衝能の低下を伴う疾患などの文脈で研究されています。

NNT CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性NNTの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

NNT CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における NNT 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はNNT転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性NNTの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のNNT遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるNNT依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびNNT発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるNNT経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。