NMNAT-3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403839-ACT

NMNAT3 codifica a nicotinamida mononucleótido adenililtransferase 3 (NMNAT-3), uma enzima-chave na biossíntese de NAD que catalisa a conversão de NMN e ATP em NAD. Em células humanas, a NMNAT-3 está principalmente associada à manutenção do pool mitocondrial de NAD, ligando-a à homeostase redox, à fosforilação oxidativa e à adaptação metabólica sob stress. Ao modular a disponibilidade de NAD, a NMNAT-3 influencia a sinalização dependente de sirtuínas e PARPs, a resiliência mitocondrial e as respostas celulares ao dano oxidativo. A desregulação do metabolismo do NAD e a disfunção mitocondrial implicam a biologia relacionada com NMNAT3 em estudos sobre neurodegeneração, stress cardiometabólico e declínios associados ao envelhecimento no metabolismo energético.

NMNAT-3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de NMNAT3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

NMNAT-3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus NMNAT3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição NMNAT3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de NMNAT-3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus NMNAT3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de NMNAT-3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via NMNAT-3 em células tumorais com expressão de NMNAT3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.