NMDAζ1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-400593

概要

GRIN1は、Ca²⁺透過性の興奮性神経伝達を担うリガンド作動性イオンチャネルであるN-メチル-D-アスパラギン酸（NMDA）受容体の必須サブユニットNR1（NMDAζ1）をコードしています。NMDA受容体シグナルは、グルタミン酸作動性入力と膜脱分極を統合し、シナプス可塑性、長期増強（LTP）、および活動依存的な遺伝子発現プログラムを調節します。さらに、シナプス後肥厚（postsynaptic density）の足場タンパク質や、CaMK/CREB、MAPK/ERKなどの下流経路との連関を介して、GRIN1は神経発達、回路の成熟、興奮毒性ストレス応答に影響を与えます。GRIN1の機能または発現の変化は、神経発達・精神神経学的表現型、発作感受性、ならびに複数の神経系疾患に関連するシナプス機能障害に関与することが示唆されています。

NMDAζ1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるGRIN1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、GRIN1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、GRIN1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、NMDAζ1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、NMDAζ1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、GRIN1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• NMDAζ1の機能に不可欠なGRIN1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、GRIN1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• NMDAζ1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびNMDAζ1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、GRIN1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  NMDAζ1 HDRプラスミド（h）および NMDAζ1 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはGRIN1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のGRIN1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。