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NMDAζ1CRISPR激活质粒(h) | sc-400593-ACT | 20 µg | $397.00 | |||
NMDAζ1CRISPR激活质粒(h2) | sc-400593-ACT-2 | 20 µg | $397.00 |
GRIN1 编码 NMDA 受体亚基 NMDAζ1(亦称 GluN1),它是人类中枢神经系统中介导 Ca²⁺ 可通透性兴奋性神经传递的异源四聚体离子型谷氨酸受体的关键组成部分。含 NMDAζ1 的受体可将突触活动与下游信号通路整合起来,从而调控突触可塑性、神经元发育以及活动依赖性的基因表达,其中包括与 CaMK/CREB 和 MAPK 相关的过程。GRIN1 的功能与兴奋/抑制平衡、长时程增强(LTP)及神经网络成熟密切相关,因此是调控学习与记忆通路中的关键节点。NMDA 受体信号失调以及 GRIN1 的变异已与神经发育和神经精神表型相关联,这也促使人们开展关于受体组成与转录调控机制的研究。
NMDAζ1 CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性GRIN1的表达。
NMDAζ1 CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的GRIN1基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于GRIN1转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性NMDAζ1表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的GRIN1位点,并能够研究内源性位点上依赖于NMDAζ1的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在GRIN1表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟NMDAζ1通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。