NMDAε4 Double Nickaseプラスミド (h): sc-401683-NIC

GRIN2Dは、ヒトNMDA受容体サブユニットNMDAε4（GluN2D）をコードしており、これはリガンド作動性イオンチャネルを構成する成分で、GluN1と会合して機能的なN-メチル-D-アスパラギン酸（NMDA）受容体を形成します。NMDAε4は、Ca²⁺流入、受容体ゲーティングの動態、ならびに神経発達や回路の興奮性を形作る活動依存的な下流シグナル伝達を調節することで、グルタミン酸作動性シナプス伝達に寄与します。カルシウム依存性経路との結合を介して、中枢神経系におけるシナプス可塑性、転写プログラム、興奮毒性ストレス応答にも影響を与えます。GRIN2Dの変異や発現調節の破綻は、文献において神経発達および発作関連の表現型と関連づけられており、グルタミン酸シグナル伝達や神経ネットワーク機能の機序研究における標的としての有用性が示唆されています。

NMDAε4 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における GRIN2D 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、GRIN2D内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、GRIN2Dの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、GRIN2Dが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。