Nkx-6.2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403584-ACT

O NKX6-2 codifica o fator de transcrição homeobox Nkx-6.2, um regulador de ligação ao DNA específico de sequência que ajuda a controlar o compromisso de linhagem e os programas de maturação no sistema nervoso central em desenvolvimento. A atividade de Nkx-6.2 integra-se às redes de padronização e diferenciação neural ao modular cascatas transcricionais que moldam decisões de destino celular e a expressão gênica a jusante. Na biologia humana, a regulação alterada de NKX6-2 é relevante para estudos de processos do neurodesenvolvimento e de programas gênicos associados à mielinização, nos quais falhas na conectividade transcricional podem perturbar estados de maturação neuronal e glial. Como regulador transcricional nuclear, Nkx-6.2 é frequentemente investigado em mapeamento de vias, temporização do desenvolvimento e análises de redes regulatórias que relacionam a ocupação de promotores/realçadores ao fenótipo.

Nkx-6.2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de NKX6-2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Nkx-6.2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus NKX6-2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição NKX6-2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Nkx-6.2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus NKX6-2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Nkx-6.2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Nkx-6.2 em células tumorais com expressão de NKX6-2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.