Nkx-6.1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-401997

概要

NKX6-1は、ホメオボックス型転写因子Nkx-6.1をコードしており、膵臓内分泌系譜の規定およびβ細胞成熟の主要な制御因子です。Nkx-6.1は、インスリン分泌、グルコース刺激に伴う代謝カップリング、ならびにPDX1、NEUROD1、MAFAに関連する遺伝子制御と交差するネットワークを介したβ細胞アイデンティティの維持を担う転写プログラムを統合的に制御します。NKX6-1の発現や活性の変化は、β細胞機能の低下およびグルコース恒常性の破綻と関連づけられており、糖尿病関連メカニズムや内分泌発生の研究において重要です。膵臓生物学にとどまらず、Nkx-6.1は、系譜コミットメントや転写制御を検討する分化モデルにおけるマーカーおよび機能的ハブとしても用いられます。

Nkx-6.1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるNKX6-1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、NKX6-1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、NKX6-1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Nkx-6.1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Nkx-6.1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、NKX6-1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Nkx-6.1の機能に不可欠なNKX6-1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、NKX6-1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Nkx-6.1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびNkx-6.1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、NKX6-1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Nkx-6.1 HDRプラスミド（h）および Nkx-6.1 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはNKX6-1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のNKX6-1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。