Nkx-6.1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401997

Descripción general

NKX6-1 codifica el factor de transcripción con homeobox Nkx-6.1, un regulador clave de la especificación del linaje endocrino pancreático y de la maduración de las células β. Nkx-6.1 coordina programas transcripcionales que controlan la secreción de insulina, el acoplamiento metabólico estimulado por glucosa y el mantenimiento de la identidad de la célula β mediante redes que se intersectan con la regulación génica asociada a PDX1, NEUROD1 y MAFA. La alteración de la expresión o la actividad de NKX6-1 se ha relacionado con un deterioro de la función de las células β y con una homeostasis de la glucosa desregulada, lo que lo hace relevante para estudios sobre mecanismos vinculados a la diabetes y el desarrollo endocrino. Más allá de la biología del páncreas, Nkx-6.1 se utiliza como marcador y como nodo funcional en modelos de diferenciación que exploran el compromiso de linaje y el control transcripcional.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Nkx-6.1 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen NKX6-1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del NKX6-1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de NKX6-1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Nkx-6.1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en NKX6-1 para la investigación de la señalización de Nkx-6.1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de NKX6-1 críticos para la función de Nkx-6.1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de NKX6-1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Nkx-6.1 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido Nkx-6.1 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus NKX6-1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Nkx-6.1 (h) y el plásmido HDR Nkx-6.1 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología NKX6-1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana NKX6-1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.