NKCC1慢病毒激活颗粒(m): sc-422971-LAC
- 针对种属：mouse
- 200 µl 高滴度即用型CRISPR/dCas9慢病毒激活粒子
- NKCC1 慢病毒激活颗粒（m）是一种协同激活介质（SAM）转录激活系统，通过细胞慢病毒转导，特异高效地上调目的基因的表达
- NKCC1慢病毒激活颗粒(m)包含以下SAM激活元素：一种是去活化的Cas9 (dCas9)核酸酶(D10A and N863A)，它融合了转录活化域VP64；一种是MS2-p65-HSF1融合蛋白；一种是目标特定的20 nt向导RNA。它们还含有杀稻瘟菌素，潮霉素和嘌呤霉素抗性基因
- 一经转导，形成的SAM复合物结合到转录起始位点上游大约200-250 nt的特定位点区域，为高效激活基因，招募转录因子
- 由 NKCC1 慢病毒激活质粒 (m) 和 NKCC1 慢病毒激活质粒 (m2) 编码的 gRNA 靶向 Slc12a2 启动子的不同调控区域。其中一种或两种设计可能可用
- 转染后，基因激活效率可以用抗体：NKCC1 Antibody (A-6): sc-514774，通过WB、IF或IHC分析
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NKCC1慢病毒激活颗粒(m) | sc-422971-LAC | 200 µl | $455.00 |
Slc12a2 编码 Na⁺-K⁺-2Cl⁻ 共转运体 NKCC1。NKCC1 是一种广泛表达的电中性转运蛋白，通过将钠、钾的电化学梯度与氯离子内流相偶联，从而调控细胞内 Cl⁻ 稳态、细胞体积以及上皮液体分泌。在小鼠组织中，NKCC1 参与上皮跨膜的离子与水分转运；通过依赖氯离子的 GABA 能信号影响神经元兴奋性；并支持分泌功能以及对渗透压应激的反应。NKCC1 的活性与 WNK–SPAK/OSR1 激酶信号通路相整合，并在功能上与 KCC 共转运体协同，以设定细胞内氯离子水平。NKCC1 相关转运过程的失调与水肿及屏障功能障碍、神经网络活动改变以及盐和水稳态紊乱相关的病理生理过程有关，因此 Slc12a2 是开展转运生物学机制研究的一个重要靶点。
NKCC1 慢病毒激活颗粒（m）通过将完整的协同激活介导体（SAM）转录激活系统包装到可直接转导的高滴度慢病毒颗粒中，满足了这一需求，从而能够在更广泛的人类细胞类型中高效上调 Slc12a2 表达。
NKCC1 慢病毒激活颗粒（m）通过慢病毒转导递送协同激活介导体（SAM）系统的所有功能组分。该系统包含三种共同转导至靶细胞的颗粒制剂：一种编码与VP64转激活域融合的无催化活性的dCas9（D10A和N863A突变），并携带布拉西定抗性基因； 一种编码MS2-p65-HSF1融合蛋白并携带潮霉素抗性基因的制剂；以及一种编码靶标特异性20 nt sgRNA（与两个MS2 RNA适配体融合）并携带嘌呤霉素抗性基因的制剂。经过慢病毒转导和表达盒的基因组整合后，SAM组分得以稳定表达，并在Slc12a2转录起始位点上游的近端启动子区域内的靶位点组装。在此处，VP64、p65和HSF1协同作用，招募内源性转录 machinery，从而驱动内源性NKCC1表达的持续上调。使用无核酸酶活性的 dCas9 可避免引入双链 DNA 断裂，并保留原生的 Slc12a2 基因组位点和调控架构。
慢病毒载体具有多项实用优势：稳定的基因组整合支持细胞分裂过程中的可遗传激活；高滴度颗粒制剂免去了内部病毒生产的需要；且与原代细胞、非增殖细胞及转染抗性细胞类型的兼容性，扩大了实验的可及性。可通过嘌呤霉素、潮霉素和布拉西定进行三重抗生素筛选，以确认并富集成功的转导。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。