Plásmido CRISPR de Activación (h) NK-2R: sc-403149-ACT

TACR2 codifica el receptor de neuroquinina 2 (NK-2R), un GPCR de clase A que se une preferentemente a taquiquininas como la neuroquinina A para regular la contractilidad del músculo liso y las respuestas secretoras. Tras la unión del ligando, NK-2R señaliza predominantemente a través de Gq/11 para activar la fosfolipasa C, impulsar la producción de IP3/DAG, movilizar Ca2+ intracelular y activar programas transcripcionales dependientes de PKC. La actividad de TACR2 se interseca con la señalización MAPK/ERK y con una comunicación más amplia mediada por neuropéptidos que modula el tono inflamatorio y la excitabilidad tisular. La señalización desregulada de TACR2/NK-2R se ha implicado en mecanismos relevantes para la hiperreactividad de las vías respiratorias y del tracto gastrointestinal, la inflamación neurógena y alteraciones del procesamiento nociceptivo.

NK-2R El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de TACR2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

NK-2R El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus TACR2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional TACR2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de NK-2R. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo TACR2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de NK-2R en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía NK-2R en células tumorales con expresión de TACR2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.