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Nicotinic Acetylcholine Receptor gamma/CHRNGCRISPR激活质粒(h) | sc-403321-ACT | 20 µg | $397.00 |
CHRNG 编码烟碱型乙酰胆碱受体(nAChR)的 γ 亚基。nAChR 是一种配体门控离子通道,在发育中的骨骼肌中介导乙酰胆碱依赖性的阳离子通量与膜去极化。含 γ 亚基的受体是胎儿期/去神经支配肌肉的标志,并在成熟神经肌肉接头中被 ε 亚基所取代,这使 CHRNG 与发育期突触发生以及受体亚基转换密切相关。通过参与胆碱能信号传导与活动依赖的肌肉分化程序,CHRNG 影响神经肌肉传递与兴奋性。CHRNG 的致病性变异与先天性肌无力样表型及胎儿运动缺失相关综合征有关,因此与神经肌肉发育及疾病机制研究密切相关。
Nicotinic Acetylcholine Receptor gamma/CHRNG CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性CHRNG的表达。
Nicotinic Acetylcholine Receptor gamma/CHRNG CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的CHRNG基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于CHRNG转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性Nicotinic Acetylcholine Receptor gamma/CHRNG表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的CHRNG位点,并能够研究内源性位点上依赖于Nicotinic Acetylcholine Receptor gamma/CHRNG的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在CHRNG表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟Nicotinic Acetylcholine Receptor gamma/CHRNG通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。