Nicotinic Acetylcholine Receptor beta 1/CHRNB1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404205-ACT

CHRNB1 codifica a subunidade β1 do receptor nicotínico de acetilcolina (nAChR) do tipo muscular, um canal iónico controlado por ligante que se monta com subunidades α, δ e ε/γ para mediar a transmissão sináptica rápida na junção neuromuscular. Após a ligação da acetilcolina, o recetor abre-se para permitir o fluxo de catiões, ligando a sinalização colinérgica à despolarização da membrana, ao acoplamento excitação–contração e à remodelação dependente da atividade da arquitetura pós-sináptica. A função de CHRNB1 integra-se com a sinalização agrina–LRP4–MuSK e com a depuração sináptica regulada pela acetilcolinesterase, que em conjunto mantêm a estabilidade da placa motora e a excitabilidade muscular. Perturbações genéticas ou autoimunes que afetem a integridade do nAChR estão associadas a síndromes miasténicas congénitas e a mecanismos relacionados com a miastenia gravis, tornando CHRNB1 um alvo-chave para o estudo de defeitos da transmissão neuromuscular e da biologia de montagem do recetor.

Nicotinic Acetylcholine Receptor beta 1/CHRNB1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CHRNB1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Nicotinic Acetylcholine Receptor beta 1/CHRNB1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CHRNB1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CHRNB1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Nicotinic Acetylcholine Receptor beta 1/CHRNB1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CHRNB1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Nicotinic Acetylcholine Receptor beta 1/CHRNB1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Nicotinic Acetylcholine Receptor beta 1/CHRNB1 em células tumorais com expressão de CHRNB1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.