Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 5/CHRNA5 Double Nickaseプラスミド (h): sc-401702-NIC

CHRNA5 は、神経型ニコチン性アセチルコリン受容体（nAChR）の補助サブユニットである α5 をコードしており、他の α および β サブユニットと会合して、リガンド作動性カチオンチャネルのゲーティング、Ca²⁺ 透過性、ならびに受容体の脱感作を調節します。コリン作動性シグナル伝達を介して、α5 を含む nAChR は膜興奮性や神経伝達物質放出に影響を及ぼし、下流のカルシウム依存性経路やシナプス可塑性プログラムと結びつきます。CHRNA5 の遺伝的多様性や発現変化は、ニコチン依存および喫煙関連表現型との関連が報告されており、喫煙曝露に関係する気道上皮の生物学や神経精神医学的形質の文脈でも研究されています。調節性サブユニットとしての CHRNA5 は、受容体組成がコリン作動性回路機能や刺激依存的な転写応答をどのように調整するかを解明するための扱いやすい手がかりを提供します。

Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 5/CHRNA5 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における CHRNA5 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、CHRNA5内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、CHRNA5の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、CHRNA5が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。