Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 3/CHRNA3 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-401582-NIC

CHRNA3 codifica a subunidade alfa 3 do receptor nicotínico de acetilcolina, um componente central de canais catiônicos ativados por ligante que mediam a neurotransmissão colinérgica rápida. Após a ligação de acetilcolina ou nicotina, receptores que contêm CHRNA3 regulam a despolarização da membrana e o influxo de Ca²⁺, acoplando-se a sinalização intracelular que influencia a excitabilidade, a transmissão sináptica e a secreção neuroendócrina. Em tecidos humanos, o CHRNA3 é proeminente nos gânglios autonômicos e contribui para vias que controlam a função cardiovascular, gastrointestinal e respiratória. Variações genéticas e expressão desregulada no locus de CHRNA3 têm sido associadas à dependência de nicotina e à suscetibilidade a doenças relacionadas ao tabagismo, sustentando sua utilidade em estudos mecanísticos de sinalização colinérgica e biologia da dependência.

Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 3/CHRNA3 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus CHRNA3 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de CHRNA3. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função CHRNA3. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com CHRNA3 interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.