NGF CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400292-ACT

神経成長因子（NGF）は分泌型のニューロトロフィンであり、高親和性受容体NTRK1/TrkAおよび低親和性受容体p75NTRを介したシグナル伝達によって、神経細胞の生存、分化、ならびに神経突起伸長を制御します。NGFの結合によりMAPK/ERK、PI3K–AKT、PLCγ経路が活性化され、シナプス可塑性、軸索の維持、ストレス応答に関与する転写プログラムが協調的に制御されます。神経系にとどまらず、NGFは末梢神経の興奮性や炎症性メディエーター間のクロストークに影響を与えることで、神経—免疫相互作用や疼痛関連の感作を調節し得ます。NGFシグナルの異常は、神経変性過程、慢性疼痛の機序、ならびに損傷・神経炎症モデルにおけるニューロトロフィン恒常性の破綻に関与することが示唆されています。

NGF CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性NGFの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

NGF CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における NGF 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はNGF転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性NGFの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のNGF遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるNGF依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびNGF発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるNGF経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。