NF-YA Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401085-ACT

NFYA codifica a subunidade NF-YA do fator de transcrição heterotrimérico NF-Y, que se liga a motivos da caixa CCAAT e coordena a arquitetura do promotor com o estado da cromatina para controlar a transcrição basal e induzível. A NF-YA contribui para a regulação da progressão do ciclo celular, da replicação e do reparo do DNA, de programas gênicos metabólicos e de vias responsivas ao estresse por meio de interações cooperativas com outros fatores de transcrição e complexos coativadores. Alterações na atividade de NFYA ou nas redes de genes-alvo de NF-Y têm sido associadas à proliferação e à diferenciação desreguladas, com relevância para programas transcricionais oncogênicos e para mudanças mais amplas na expressão gênica observadas em múltiplos contextos de doença. Essas propriedades tornam o NFYA um nó útil para investigar a regulação dirigida por promotores, circuitos transcricionais e o redirecionamento de vias em modelos celulares humanos.

NF-YA O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de NFYA sem alterar a sequência de ADN subjacente.

NF-YA O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus NFYA em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição NFYA, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de NF-YA. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus NFYA nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de NF-YA no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via NF-YA em células tumorais com expressão de NFYA silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.