NF-L CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-402254

概要

NEFLはニューロフィラメント軽鎖（NF-L）をコードしており、NF-LはNEFMおよびNEFHとともに集合して神経細胞の細胞骨格を形成し、軸索径と機械的安定性の維持に寄与する中間径フィラメントの中核タンパク質です。NF-Lはニューロフィラメントの輸送と配置（組織化）にも関与し、軸索内輸送、細胞骨格ダイナミクス、神経回路の長距離結合に影響を及ぼします。NEFL機能が破綻するとニューロフィラメントの組み立てや軸索の完全性が損なわれ、細胞骨格ストレス経路と進行性の神経機能障害との関連が示されます。NEFLの変異やNF-L恒常性の異常は、軸索構造や輸送が障害される遺伝性ニューロパチーや神経変性過程と関連しています。

NF-L CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるNEFL遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、NEFL内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、NEFLのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、NF-Lタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、NF-Lシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、NEFL欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• NF-Lの機能に不可欠なNEFLエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、NEFLゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• NF-L CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびNF-L CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、NEFL遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  NF-L HDRプラスミド（h）および NF-L HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはNEFLホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のNEFL標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。