NFκB p50 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-421876

概要

Nfkb1 は、p105 前駆体のプロセシングによって生成される NF-κB 転写因子ファミリーの中核的な DNA 結合構成要素である NFκB p50 をコードします。NFκB p50 は、TNFR、IL-1R、Toll 様受容体などの受容体下流に位置するカノニカルな NF-κB シグナル伝達に関与し、炎症性遺伝子発現、自然免疫および獲得免疫応答、細胞生存、ストレスシグナルを制御します。二量体の組み合わせにより、p50 を含む複合体は転写を活性化（例：RelA/p65 とのヘテロ二量体）することも、抑制（例：p50 ホモ二量体）することもあり、サイトカインプログラムやマクロファージ・リンパ球機能を形作ります。Nfkb1 駆動経路の破綻は、慢性炎症、自己免疫、感染、腫瘍促進性の炎症性微小環境に関するマウスモデルにおいて、機序的な関連付けとして広く用いられています。

NFκB p50 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるNfkb1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Nfkb1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Nfkb1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、NFκB p50タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、NFκB p50シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Nfkb1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• NFκB p50の機能に不可欠なNfkb1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Nfkb1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• NFκB p50 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびNFκB p50 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Nfkb1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  NFκB p50 HDRプラスミド（m）および NFκB p50 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはNfkb1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のNfkb1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。