NF-1X CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-421875

概要

Nfix は核因子 I の X 型（NF-1X）をコードしており、NFI のコンセンサス配列を認識して結合する配列特異的 DNA 結合型転写因子として、発生過程におけるプロモーターおよびエンハンサー活性を調節します。マウスでは NF-1X は神経系および骨格筋における系譜決定と成熟プログラムに寄与し、細胞周期からの離脱、分化、ならびに細胞外マトリックス関連遺伝子の発現に影響します。NF-1 ファミリー因子はクロマチンリモデリングや転写共役因子ネットワークと連携して、発生のタイミングと組織構築を協調的に制御します。NFIX 機能の破綻は発達関連症候群や成長・分化表現型の異常と関連づけられており、Nfix は神経発生および筋形成に関わる遺伝子制御回路を研究するうえで有用な結節点となります。

NF-1X CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるNfix遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Nfix内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Nfixのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、NF-1Xタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、NF-1Xシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Nfix欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• NF-1Xの機能に不可欠なNfixエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Nfixゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• NF-1X CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびNF-1X CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Nfix遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  NF-1X HDRプラスミド（m）および NF-1X HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはNfixホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のNfix標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。