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NeurotensinCRISPR激活质粒(h) | sc-401958-ACT | 20 µg | $397.00 |
神经降压素(NTS)编码一种分泌型神经肽,可通过神经降压素受体传递信号,从而调节神经递质传递、神经内分泌分泌、胃肠道运动以及痛觉处理。在人体组织中,神经降压素驱动的 GPCR 信号会影响包括 PLC/PKC、MAPK/ERK 和 PI3K/AKT 在内的第二信使级联反应,将肽类释放与细胞兴奋性变化及转录程序的调整联系起来。NTS 的表达受神经元活动和代谢线索调控;在多种模型系统中,神经降压素信号的改变与多巴胺能通路失衡、炎症相关信号以及肿瘤相关细胞状态有关。这些特征使 NTS 成为研究肽介导的细胞通讯、受体去敏化以及疾病相关情境下下游通路重塑的一个有用节点。
Neurotensin CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性NTS的表达。
Neurotensin CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的NTS基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于NTS转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性Neurotensin表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的NTS位点,并能够研究内源性位点上依赖于Neurotensin的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在NTS表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟Neurotensin通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。