Neuroplastin Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422859

Visão geral

O Nptn de camundongo codifica a neuroplastina, uma proteína de adesão celular glicosilada da superfamília das imunoglobulinas, enriquecida nas sinapses e em outros compartimentos de membrana, onde sustenta o crescimento de neuritos, a organização sináptica e a plasticidade dependente de atividade. A neuroplastina também atua como uma subunidade auxiliar essencial das Ca²⁺-ATPases da membrana plasmática (PMCAs), ligando o Nptn à homeostase do cálcio intracelular e à sinalização regulada por Ca²⁺, que molda a excitabilidade e a expressão gênica. Por meio dessas funções, o Nptn contribui para o desenvolvimento de circuitos e para processos de remodelamento sináptico relevantes para fenótipos do neurodesenvolvimento e neuropsiquiátricos, bem como para defeitos mais amplos decorrentes de uma regulação inadequada do manejo de cálcio. Sua localização na membrana e sua rede de interações fazem dele um nó útil para estudar sinalização dependente de adesão, maturação sináptica e vias dependentes de cálcio em modelos neuronais e gliais de camundongo.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO Neuroplastin (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Nptn em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Nptn, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Nptn na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína Neuroplastin.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Nptn para a investigação da sinalização de Neuroplastin, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Nptn críticos para a função Neuroplastin
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Nptn para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo Neuroplastin Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo Neuroplastin Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Nptn. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo Neuroplastin Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR Neuroplastin (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Nptn para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Nptn definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.