neuropilin-2 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h): sc-400650-LAC

O gene humano NRP2 codifica a neuropilina-2, um correceptor transmembranar multifuncional que modula sinais de orientação e a sinalização de fatores de crescimento, incluindo as semaforinas de classe 3 e ligantes da família VEGF. Por meio de interações com plexinas e receptores de VEGF, a neuropilina-2 influencia o direcionamento axonal, o desenvolvimento linfático e vascular, a migração de células endoteliais e imunes e a dinâmica epitélio–mesênquima. A sinalização dependente de NRP2 afeta a remodelação do citoesqueleto, a adesão mediada por integrinas e vias a jusante, como PI3K/AKT e MAPK, de maneira dependente do contexto. Alterações na expressão ou na atividade da neuropilina-2 têm sido associadas a interações tumor–estroma, angiogênese/linfangiogênese, inflamação e fenótipos metastáticos, sustentando seu estudo em modelos de câncer e biologia vascular.

As Partículas de Ativação Lentivirais neuropilin-2 (h) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de NRP2 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais neuropilin-2 (h) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição NRP2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de neuropilin-2. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo NRP2 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.