neuroligin 1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401668-ACT

O NLGN1 humano codifica a neuroligin-1, uma proteína pós-sináptica de adesão celular que se liga às neurexinas pré-sinápticas para organizar a formação, maturação e estabilidade de sinapses excitatórias. A neuroligin-1 atua como plataforma de ancoragem para complexos proteicos sinápticos e contribui para a plasticidade sináptica dependente de atividade ao coordenar a localização de receptores e a sinalização a jusante que molda a conectividade neuronal. Pelo seu papel na sinaptogênese e no refinamento de circuitos, o NLGN1 é frequentemente estudado em vias que regulam a transmissão glutamatérgica e a remodelação sináptica. Alterações na sinalização neuroligin–neurexina e a desregulação de NLGN1 têm sido investigadas no contexto de mecanismos de doenças do neurodesenvolvimento e neuropsiquiátricas, incluindo fenótipos de disfunção sináptica.

neuroligin 1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de NLGN1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

neuroligin 1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus NLGN1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição NLGN1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de neuroligin 1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus NLGN1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de neuroligin 1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via neuroligin 1 em células tumorais com expressão de NLGN1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.