Plásmido CRISPR de Activación (h) neuroglobin: sc-401696-ACT

El NGB humano codifica la neuroglobina, una globina con capacidad de unión al oxígeno enriquecida en neuronas que favorece la adaptación celular a la hipoxia y al estrés oxidativo. Se ha implicado a la neuroglobina en el mantenimiento de la función mitocondrial y de la homeostasis redox, con funciones descritas en la modulación del manejo de especies reactivas de oxígeno y de la señalización relacionada con el óxido nítrico. A través de estos procesos, NGB vincula la disponibilidad de oxígeno con el metabolismo neuronal y con vías de respuesta al estrés que influyen en la supervivencia bajo condiciones isquémicas o inflamatorias. La alteración de la expresión de neuroglobina se ha asociado con la susceptibilidad a la neurodegeneración y en modelos de lesión cerebrovascular, lo que la convierte en una diana útil para estudios mecanísticos de la resiliencia neuronal.

neuroglobin El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de NGB sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

neuroglobin El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus NGB en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional NGB, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de neuroglobin. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo NGB y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de neuroglobin en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía neuroglobin en células tumorales con expresión de NGB silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.