Neurofibromin 2/NF2/Merlin Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400504-ACT

NF2 codifica a merlina (neurofibromina 2), um supressor tumoral associado à membrana que conecta o citoesqueleto cortical de actina a recetores transmembrana e a complexos juncionais para regular a inibição por contacto e a mecânica celular. A merlina modula a sinalização da via Hippo ao restringir a atividade de YAP/TAZ e cruza-se com as redes de recetores tirosina-quinase, PI3K–AKT e MAPK para coordenar proliferação, migração e polaridade. Também contribui para a estabilidade das junções aderentes e das junções apertadas, influenciando a arquitetura tecidular e as respostas de mecanotransdução. A disrupção da função de NF2 está implicada na neurofibromatose do tipo 2 e num espectro de tumores deficientes em merlina, tornando o NF2 um nó-chave para o estudo do controlo do crescimento e da sinalização do citoesqueleto.

Neurofibromin 2/NF2/Merlin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de NF2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Neurofibromin 2/NF2/Merlin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus NF2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição NF2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Neurofibromin 2/NF2/Merlin. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus NF2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Neurofibromin 2/NF2/Merlin no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Neurofibromin 2/NF2/Merlin em células tumorais com expressão de NF2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.