Plásmido CRISPR de Activación (r) neurexin I: sc-437279-ACT

La neurexina I es una molécula presináptica de adhesión celular que organiza la formación y la maduración de las sinapsis al unirse a neuroliginas y a otros socios sinápticos a través de la hendidura sináptica. En neuronas de rata, favorece la probabilidad de liberación de neurotransmisores, el acoplamiento (docking) de vesículas sinápticas y la remodelación de circuitos dependiente de la actividad, conectando el reconocimiento extracelular con el andamiaje y la señalización intracelulares. Los complejos mediados por neurexina se relacionan con el posicionamiento de canales de calcio y con la arquitectura de la zona activa sináptica, influyendo en el equilibrio excitatorio/inhibitorio y en la conectividad de la red. La desregulación de las vías de la neurexina se asocia con mecanismos de enfermedades del neurodesarrollo y neuropsiquiátricas, lo que la convierte en una diana clave para estudiar sinaptopatías y fenotipos a nivel de circuito en sistemas modelo.

neurexin I El plásmido de activación CRISPR (r) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

neurexin I El plásmido de activación CRISPR (r) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional , donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de neurexin I. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de neurexin I en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía neurexin I en células tumorales con expresión de silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.