Neu1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401488-ACT

NEU1 codifica a neuraminidase humana 1 (Neu1), uma sialidase lisossomal que remove ácidos siálicos terminais de glicoproteínas e glicolipídios, moldando o catabolismo lisossomal e a composição dos glicanos na superfície celular. A Neu1 atua no complexo multienzimático lisossomal e contribui para a renovação e o tráfego de substratos sialilados, influenciando a sinalização de receptores e vias endocíticas por meio da regulação da dessialilação de proteínas. A alteração da atividade de NEU1 está relacionada à desorganização da homeostase lisossomal e a padrões aberrantes de glicosilação que afetam a sinalização inflamatória e processos de adesão celular. A disfunção de NEU1 associa-se a fenótipos de doenças de depósito lisossomal, tornando a Neu1 um alvo relevante para estudar mecanismos dependentes de sialilação em células humanas.

Neu1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de NEU1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Neu1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus NEU1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição NEU1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Neu1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus NEU1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Neu1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Neu1 em células tumorais com expressão de NEU1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.