Nek11 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404923-ACT

O gene humano **NEK11** codifica a quinase de serina/treonina Nek11, uma quinase relacionada à NIMA envolvida no controle de checkpoints do ciclo celular e na resposta a danos no DNA. A Nek11 atua a jusante da sinalização ATR/Chk1 para regular a progressão G2/M ao modular a estabilidade e a atividade de reguladores mitóticos-chave, incluindo a CDC25A, coordenando assim as respostas ao estresse de replicação e a entrada oportuna em mitose. Por meio dessas funções, **NEK11** contribui para a manutenção da integridade do genoma e influencia a sensibilidade celular ao estresse genotóxico. A sinalização de checkpoint desregulada e a atividade alterada de **NEK11** têm sido associadas a fenótipos proliferativos e à instabilidade genômica observados em diversos contextos relevantes para o câncer.

Nek11 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de NEK11 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Nek11 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus NEK11 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição NEK11, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Nek11. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus NEK11 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Nek11 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Nek11 em células tumorais com expressão de NEK11 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.