Plasmide CRISPR d'Activation (h) Nek11: sc-404923-ACT

Le gène humain **NEK11** code la kinase sérine/thréonine Nek11, une kinase apparentée à NIMA impliquée dans le contrôle des points de contrôle du cycle cellulaire et la réponse aux dommages de l’ADN. Nek11 agit en aval de la signalisation ATR/Chk1 pour réguler la progression G2/M en modulant la stabilité et l’activité de régulateurs mitotiques clés, dont CDC25A, coordonnant ainsi les réponses au stress réplicatif et l’entrée en mitose au moment opportun. Par ces fonctions, NEK11 contribue au maintien de l’intégrité du génome et influence la sensibilité cellulaire au stress génotoxique. Une signalisation des points de contrôle dérégulée et une activité de NEK11 altérée ont été associées à des phénotypes prolifératifs et à l’instabilité génomique observés dans divers contextes liés au cancer.

Nek11 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de NEK11 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Nek11 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus NEK11 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription NEK11, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Nek11. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus NEK11 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Nek11 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Nek11 dans les cellules tumorales présentant une expression de NEK11 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.