NEIL2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-408091-ACT

NEIL2 (endonuclease VIII-like 2) é uma DNA glicosilase/liase AP que inicia o reparo por excisão de bases (BER) ao reconhecer e remover lesões oxidativas no DNA, incluindo aquelas que surgem em DNA de fita simples, associado à transcrição e em replicação. Ao acoplar o reconhecimento da lesão à incisão da fita, a NEIL2 ajuda a manter a estabilidade do genoma e modula a fidelidade transcricional sob estresse oxidativo, interagindo funcionalmente com fatores do BER como APEX1, POLB, XRCC1 e as etapas subsequentes de ligação. A atividade de NEIL2 está ligada às respostas celulares a espécies reativas de oxigênio e à inflamação, processos que moldam a carga mutacional e a sinalização de estresse em muitos contextos biológicos. A capacidade desregulada de reparo de DNA oxidativo envolvendo NEIL2 tem sido estudada em relação à instabilidade genômica associada ao câncer e a mecanismos de doenças inflamatórias crônicas, reforçando sua relevância na biologia de danos ao DNA.

NEIL2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de NEIL2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

NEIL2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus NEIL2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição NEIL2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de NEIL2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus NEIL2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de NEIL2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via NEIL2 em células tumorais com expressão de NEIL2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.