NEGR1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-435831-ACT

Negr1 codifica o regulador 1 do crescimento neuronal (NEGR1), uma molécula de adesão celular da família IgLON ancorada por GPI, enriquecida na superfície neuronal, onde sustenta o crescimento de neuritos, a organização sináptica e a maturação de circuitos. Em modelos do sistema nervoso de camundongo, o NEGR1 está ligado à conectividade dependente de atividade e à sinalização em microdomínios de membrana que influencia a orientação axonal e a dinâmica das espinhas dendríticas. Alterações na expressão de NEGR1 têm sido associadas a fenótipos do neurodesenvolvimento e neuropsiquiátricos, e estudos genéticos conectaram loci de NEGR1 à regulação do peso corporal e a traços comportamentais. Essas características tornam o NEGR1 um nó útil para estudar sinalização mediada por adesão, plasticidade estrutural e relações genótipo–fenótipo em contextos de pesquisa do cérebro e do metabolismo.

NEGR1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Negr1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

NEGR1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Negr1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Negr1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de NEGR1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Negr1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de NEGR1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via NEGR1 em células tumorais com expressão de Negr1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.