NECAP 2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-409444-ACT

NECAP2 codifica a NECAP 2, uma proteína adaptadora endocítica enriquecida no tráfego mediado por clatrina, que se liga à AP-2 e a fatores acessórios para coordenar a maturação das fossas revestidas e o desrevestimento das vesículas. Por meio de suas interações com módulos relacionados a FCHo/Eps15 e circuitos regulatórios da AP-2, a NECAP 2 influencia a seleção de cargas, a internalização de receptores e a dinâmica de reciclagem que molda a transdução de sinal na membrana plasmática. Esses processos se cruzam com vias que controlam o turnover de receptores de fatores de crescimento, a remodelação sináptica e de membranas neuronais e respostas ao estresse celular ligadas a desequilíbrios no tráfego. Alterações na endocitose e na função de proteínas adaptadoras são frequentemente investigadas em biologia do câncer e neurobiologia devido ao seu impacto na disponibilidade de receptores, na amplitude da sinalização e na homeostase de membrana.

NECAP 2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de NECAP2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

NECAP 2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus NECAP2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição NECAP2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de NECAP 2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus NECAP2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de NECAP 2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via NECAP 2 em células tumorais com expressão de NECAP2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.