NDUFB5 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-425783-ACT

O gene murino **Ndufb5** codifica a proteína **NDUFB5**, uma subunidade acessória do complexo I da cadeia respiratória mitocondrial (NADH:ubiquinona oxidorredutase) que dá suporte à fosforilação oxidativa e à produção de ATP celular. Como parte do sistema de transporte de elétrons na membrana interna mitocondrial, a NDUFB5 contribui para a transferência de elétrons derivados do NADH, a manutenção do potencial de membrana mitocondrial e a regulação da homeostase de espécies reativas de oxigênio. Alterações na função do complexo I estão amplamente associadas a respostas ao estresse metabólico e a vias de disfunção mitocondrial que se cruzam com neurodegeneração, fenótipos cardiometabólicos e sinalização inflamatória. Assim, **Ndufb5** é relevante para estudar como a bioenergética mitocondrial remodela o estado celular ao longo do desenvolvimento e em modelos de doença em sistemas murinos.

NDUFB5 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Ndufb5 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

NDUFB5 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Ndufb5 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Ndufb5, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de NDUFB5. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Ndufb5 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de NDUFB5 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via NDUFB5 em células tumorais com expressão de Ndufb5 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.