NDST1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404078-ACT

NDST1 codifica a N-desacetilase/N-sulfotransferase 1, uma enzima residente no complexo de Golgi que catalisa etapas-chave de modificação durante a biossíntese do sulfato de heparano, incluindo a N-desacetilação e a N-sulfatação de resíduos de glicosamina. Essas reações moldam os padrões de sulfatação do sulfato de heparano, que determinam a ligação e os resultados de sinalização de fatores de crescimento, morfógenos e quimiocinas na matriz extracelular e em proteoglicanos de superfície celular. Ao modular vias dependentes de sulfato de heparano, como a sinalização de FGF, Wnt, Hedgehog e BMP, o NDST1 influencia a adesão, a migração e a diferenciação celular, bem como o padrão de organização dos tecidos. A remodelação desregulada do sulfato de heparano tem sido associada a programas de desenvolvimento alterados e à sinalização do microambiente relevante para a biologia do câncer, inflamação e fenótipos neurológicos e vasculares, motivando estudos mecanísticos da arquitetura de glicosaminoglicanos controlada por NDST1.

NDST1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de NDST1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

NDST1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus NDST1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição NDST1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de NDST1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus NDST1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de NDST1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via NDST1 em células tumorais com expressão de NDST1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.